细菌DNA的提取方法有哪些提取少量的细菌DNA,有哪些方法?

Answer 1

1 快速微量提取法
A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中,12000rpm离心1min, 丢去上清夜,收集菌体.
B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr.
C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液,混匀后于13000rpm离心15min.
D.取上清液,用苯酚抽提2次,氯仿抽提1次.
E.加两倍体积无水乙醇,1/10体积醋酸钾(3M ,pH8.0),-20度保存1小时后,13000rpm离心15min,弃上清液,沉淀用70%乙醇洗2次；置于室温干燥后,溶于50ulTE溶液中,置4oC保存备用.
2 蛋白酶/SDS法制备
先用10ml含适当抗生素的GBM过夜培养Delftia sp.,第二天4000rpm离心10min收集菌体,用Washing TE（50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0）洗菌体2次,之后将菌体充分悬浮在5ml 1×TE缓冲液中,先后加入0.5ml 5mg/L的蛋白酶、0.5ml 10% SDS,轻轻混匀后50℃放置3h~5h,接着用等体积的Tris饱和苯酚抽提2次,苯酚/氯仿/异戊醇抽提一次,氯仿抽提一次后,乙醇沉淀DNA,用自动移液器吸管头将絮状DNA沉淀块吸附到Ep管中,70%乙醇洗2次,干燥后溶于适当1×TE或ddH2O中.
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1) 细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中,37℃摇床（300rpm）培养过液.
2) 细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管中,室温8000rpm离心5min,弃上清,沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）中（用ddH2O也行).
3) 菌体裂加入6μl 50mg/ml的溶菌酶,37℃作用2h.再加2mol/LNaCl50μl,10%SDS 110μl,20mg/ml的蛋白酶K 3μl,50℃作用3h或37℃过夜.（此时菌液应为透明粘稠液体）
4) 抽提：菌液均分到两个1.5ml EP管,加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5-10min.12000rpm离心10min.抽提两次.（上清很粘稠,吸取时应小心,最好枪头尖应剪去）
5) 沉淀：加0.6倍体积的异丙醇,混匀,室温放置10min.1 2000rpm离心10min.
6)洗涤：沉淀用75%的乙醇洗涤.
7) 抽（凉）干后,溶于50μl ddH2O中,取2-5μl电泳.作PCR模板用.