下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：（1）在构建基因表

Question

下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结 构或细胞．请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，应使用___限制酶切割目的基因和质粒，再用___酶使它们连接起来．重组质粒除包括目的基因、标志基因、复制原点外，还应该有___、___．
（2）限制性核酸内切酶的作用是___，作用的化学键是___．
（3）研究人员通常采用___法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，通常采用___方法．
（4）利用___技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培养成新个体，该过程利用的原理是___，该培养过程的培养基还要添加的植物激素有生长素和___．^r

Answer 1

（1）在构建基因表达载体中，如果目的基因和载体用同一种限制酶切割，获得的黏性末端相同，将会发生自身环化现象，故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割，以获得不同的黏性末端，故应选用PstⅠ和SmaⅠ对含...