动物细胞培养时需要在培养液中加入动物血清．为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，科研人员做了以下实验：将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间．

Question

动物细胞培养时需要在培养液中加入动物血清．为了研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，科研人员做了以下实验：
将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间．取三根刻度吸管，将血清从上到下轻轻吸成均等的三份，分别装入消毒后的瓶中，标记为上、中、下，再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中，混合均匀备用．分别取等量的不同“层次“的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中，再接种小鼠上皮细胞（接种细胞密度为5×10⁴个/mL），在适宜条件下培养72h后，进行计数．结果如表：

组别	上	中	下	混
72h 细胞数/个•mL-1	9.75×104	1.04×105	7.5×104	1.85×105

请回答：
（1）吸取血清过程中，要严格禁止震动和摇晃，目的是______．
（2）细胞培养过程中，二氧化碳的主要作用是______，每天更换培养基的目的是______．
（3）如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图所示的操作，统计出来的数据比实际值偏______，正确的操作应该是______．

（4）从表中结果可以看出，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同．造成这种结果的主要原因是不同“层次“血清中______．
（5）根据实验结果，在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是______．

Answer 1

（1）本实验的目的是研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响，因此吸取血清过程中，要严格禁止震动和摇晃，防止不同层次血清混合．
（2）动物细胞培养需要一定的气体环境，即95%氧气+5%二氧化碳，其中二氧化碳的主要作用是维持培养液的pH；每天更换培养基可以补充营养物质，并能去除代谢废物，这样有利于细胞增殖．
（3）如果用血细胞计数板计数细胞时，应该先盖上盖玻片，后滴加细胞悬液，若先滴加细胞悬液，后盖上盖玻片，则统计出来的数据比实际值偏大．
（4）由表可知，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同，且均比混合血清中自爆增殖速度慢，原因主要是不同“层次“血清中营养成分不全．
（5）由表可知混合血清中细胞增殖速率最快，因此在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是将血清充分混匀后再加人到培养液中．
故答案为：
（1）防止不同层次血清混合
（2）维持培养液的pH     补充营养物质和去除代谢废物，有利于细胞增殖
（3）大    先盖上盖玻片，后滴细胞悬液
（4）营养成分不全（或营养成分不同） 
（5）将血清充分混匀后再加人到培养液中