CTB是霍乱弧菌产生的肠毒素（蛋白质）结构的一部分，可用作针对霍乱弧菌的疫苗．研究人员提取了控制CTB合成的基因（ctb），构建基因表达载体（如图所示），将其导入番茄，然后用转基

Question

CTB是霍乱弧菌产生的肠毒素（蛋白质）结构的一部分，可用作针对霍乱弧菌的疫苗．研究人员提取了控制CTB合成的基因（ctb），构建基因表达载体（如图所示），将其导入番茄，然后用转基因番茄饲喂试验小鼠，检测疫苗的有效性．请回答相关问题：

（1）为了在短时间内获得大量基因，可以采用___技术．与细胞内DNA复制时的解旋过程相比，该技术的DNA解链过程有何不同？___（写出一点即可．）
（2）使用两种限制酶切割载体可防止切开的载体的两个末端重新连接起来，原因是___．
（3）可采用___方法将基因表达载体导人番茄细胞，然后在加入了___的培养基中进行初步筛选，之后还需用___方法检测ctb基因是否整合到番茄染色体的DNA上．
（4）提取转基因番茄不同部位的蛋白质进行检测，发现只有果实中含有CTB．ctb基因只能在果实细胞中表达，这与基因表达载体中的___有关．
（5）用转基因番茄果实饲喂试验小鼠，若能在小鼠的血清中检测到___，则说明该转基因疫苗是有效的．

Answer 1

（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因；与细胞内DNA复制时的解旋过程相比，该技术的DNA解链过程不需要解旋酶，通过高温变性来实现解旋．
（2）两种限制酶切割载体可以产生不同的末端，因此使用两种限制酶切割载体可防止切开的载体的两个末端重新连接起来．
（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此在加入卡那霉素的培养基中进行初步筛选；检测目的基因是否导入受体细胞常用DNA分子杂交技术．
（4）ctb基因只能在果实细胞中表达，这与基因表达载体中的E8启动子有关．
（5）转基因疫苗若是有效的，则会表达产生CTB，CTB能引起机体发生免疫反应产生相应的抗体，即CTB抗体．
故答案为：
（1）PCR    不需要解旋酶
（2）两种限制酶切割载体可以产生不同的末端
（3）农杆菌转化法   卡那霉素     DNA分子杂交
（4）E8启动子          
（5）CTB抗体