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论述纯化胞内酶的方法?
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论述纯化胞内酶的方法?
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答案和解析
这也太笼统了点
一般胞内的话,需要先裂解细胞释放出酶.如果是酵母表达的胞内酶,那么裂解就非常困难.需要高压均质机这样的特殊仪器才能裂解.
裂解后的上清可以通过盐析沉淀或者调节pH沉淀或者热变性(耐高温酶)等方法做粗提取分离.
粗提取的样品可以通过不同的色谱层析,比如离子交换,疏水相互作用,凝胶过滤等进行精细纯化分离.
完成精细纯化的酶换液至合适的缓冲体系,一般需要添加一些保护活性的试剂(甘油),再检测浓度,活性等数据完成纯化.
一般胞内的话,需要先裂解细胞释放出酶.如果是酵母表达的胞内酶,那么裂解就非常困难.需要高压均质机这样的特殊仪器才能裂解.
裂解后的上清可以通过盐析沉淀或者调节pH沉淀或者热变性(耐高温酶)等方法做粗提取分离.
粗提取的样品可以通过不同的色谱层析,比如离子交换,疏水相互作用,凝胶过滤等进行精细纯化分离.
完成精细纯化的酶换液至合适的缓冲体系,一般需要添加一些保护活性的试剂(甘油),再检测浓度,活性等数据完成纯化.
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