成骨细胞消化后不贴壁的问题我养的是成骨细胞,消化总是存在着问题,以前是用1ml左右胰酶消化一会儿,再弃去大部分留少量继续消化,但是发现总是培养瓶的四周的细胞消化的很快都漂了起来

Question

成骨细胞消化后不贴壁的问题
我养的是成骨细胞,消化总是存在着问题,以前是用1ml左右胰酶消化一会儿,再弃去大部分留少量继续消化,但是发现总是培养瓶的四周的细胞消化的很快都漂了起来,可是中间的还没太消化好,这个时候一吹打就有好多细胞吹打不下来,24小时后观察,发现有好多悬浮的细胞没有贴壁,我分析可能是吹打的时候细胞受了损伤,还有那些先消化下来的细胞胰酶作用时间太长了,后来我再消化时就增加了胰酶的量基本覆盖平底0.5-0.6ml,这回消化的程度很同步,吹打也比较容易,但是两天后观察,同样也有很多细胞没有贴壁,这是为什么呢?加的胰酶要倒掉吗,我没有倒,直接加了培养液(含10%血清)吹打.

Answer 1

博凌科为先加入少量胰酶0.5-1ml左右使其在所有细胞上流过,倒掉,去除漂浮的死细胞,然后加入0.5ml左右胰酶,倾斜几次培养瓶,使胰酶在细胞上层来回的 走几次,使所有的细胞都能在几乎同一时间接触到胰酶.然后消化到手动瓶子就有细胞脱落时加入培养液,吹至均匀分散.