某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：（1）将含有目的基因

Question

某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I酶切，酶切产物用______催化连接后，两个DNA片段的连接结果有______种．
（2）在构建重组质粒时，应选用______两种酶对______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入______，理由是______．
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用______技术，愈伤组织经______进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______．

Answer 1

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I酶切，用DNA连接酶催化连接，两个DNA片段的连接结果有3种，目的基因自身连接、质粒自身连接和重组质粒．
（2）只要Sa1I酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；HindIII会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素．
（4）用植物组织培养技术将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株，脱分化形成的愈伤组织，经细胞增殖和分化进而形成完整植株，此过程必须添加植物激素进行调节，即生长素和细胞分裂素．
故答案为：
（1）DNA连接酶   3
（2）Sal I、HindIII   质粒和含抗盐基因的DNA
（3）氨苄青霉素    重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏     
（4）植物组织培养   细胞培殖和分化    植物激素（生长调节剂、生长素和细胞分裂素）