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某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因.利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题:(1)将含有目的基因
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某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点,同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因.利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示,请回答下列问题:
(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I酶切,酶切产物用______催化连接后,两个DNA片段的连接结果有______种.
(2)在构建重组质粒时,应选用______两种酶对______进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(3)为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入______,理由是______.
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用______技术,愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______.![](https://www.zaojiaoba.cn/2018-08/29/1535505050-9590.jpg)
(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I酶切,酶切产物用______催化连接后,两个DNA片段的连接结果有______种.
(2)在构建重组质粒时,应选用______两种酶对______进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(3)为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入______,理由是______.
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用______技术,愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______.
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▼优质解答
答案和解析
(1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I酶切,用DNA连接酶催化连接,两个DNA片段的连接结果有3种,目的基因自身连接、质粒自身连接和重组质粒.
(2)只要Sa1I酶切割含有目的基因的DNA与质粒,形成相同的黏性末端,容易发生自身连接和反向接入;HindIII会破坏目的基因;则在构建重组质粒时,应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(3)选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时,形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏,为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入氨苄青霉素.
(4)用植物组织培养技术将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株,脱分化形成的愈伤组织,经细胞增殖和分化进而形成完整植株,此过程必须添加植物激素进行调节,即生长素和细胞分裂素.
故答案为:
(1)DNA连接酶 3
(2)Sal I、HindIII 质粒和含抗盐基因的DNA
(3)氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏
(4)植物组织培养 细胞培殖和分化 植物激素(生长调节剂、生长素和细胞分裂素)
(2)只要Sa1I酶切割含有目的基因的DNA与质粒,形成相同的黏性末端,容易发生自身连接和反向接入;HindIII会破坏目的基因;则在构建重组质粒时,应选用SalI、HindIII两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(3)选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时,形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏,为筛选出导入了重组质粒的农杆菌,应在培养基中加入氨苄青霉素.
(4)用植物组织培养技术将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株,脱分化形成的愈伤组织,经细胞增殖和分化进而形成完整植株,此过程必须添加植物激素进行调节,即生长素和细胞分裂素.
故答案为:
(1)DNA连接酶 3
(2)Sal I、HindIII 质粒和含抗盐基因的DNA
(3)氨苄青霉素 重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏
(4)植物组织培养 细胞培殖和分化 植物激素(生长调节剂、生长素和细胞分裂素)
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