植酸酶能提高饲料中磷的利用率，减少磷随畜禽粪便排出量，进而降低环境污染．科学家试图将黑曲霉植酸酶基因（phyA）转入猪细胞中，以培育出转植酸酶基因猪．如图为实验过程中基因

Question

植酸酶能提高饲料中磷的利用率，减少磷随畜禽粪便排出量，进而降低环境污染． 科学家试图将黑曲霉植酸酶基因（phyA）转入猪细胞中，以培育出转植酸酶基因猪．如图为实验过程中基因表达载体的构建过程，图中A、A1，B、B1表示引物，NheⅠ（G^↓CTAGC），XhoⅠ（G^↓TCGAG）为限制酶．请问答．

（1）实验室通用是利用从黑曲霉细胞中提取的RNA，再通过___等技术形成 phyA对应的cDNA，从基因结构分析，这一cDNA比黑曲霉细胞中的phyA少___等结构．
（2）由图可知，科学家首先将黑曲霉植酸酶基因phyA与猪腮腺分泌蛋白基因信号肽基因 （ps）拼接在一起，其目的是___．实验室中，过程②（解链）一般可通过___的方法完成，利用___将这两个DNA片段连接起来．
（3）限制酶X ho I切割DNA形成的黏性末端可以表示为___．过程④中同时利用Nhe I酶和Xho I酶处理目的基因和运载体，其主要优点是___．
（4）研究中需要将重组质粒导入___，再运用胚胎工程技术培育获得转基因猪，选取这类细胞作为目的基因的受体细胞的主要依据是___．

Answer 1

（1）以RNA为模板合成DNA的过程称为逆 （反）转录；由于mRNA是以基因中编码蛋白质的片段为模板，利用碱基互补配对合成的，因此cDNA中没有启动子、终止子等结构．
（2）由于不同组织细胞中选择性表达的基因不同，因此，为使植酸酶基因能在腮腺细胞中特异、高效地表达，通常将植酸酶基因插到腮腺分泌蛋白基因的启动子后．实验室中DNA解旋（如PCR）通常采用加热的方法实现，再利用引物AI和BI的一端有部分碱基序列可以互补配对将这两个DNA片段连接起来．
（3）限制酶XhoⅠ的识别序列及切割位点为：-G^↓TCGAG-，因此限制酶X ho I切割DNA形成的黏性末端可以表示为-AGCT；过程④中同时利用Nhe I酶和Xho I酶处理目的基因和运载体，这样可以防止目的基因与运载体反向连接，保证目的基因定向插入运载体中，保证目的基因能够正确表达．
（4）由于动物体细胞的全能性受到限制，因此，一般动物基因工程的受体细胞选择受精卵（受精卵的全能性最高）．
故答案为：
（1）反（逆）转录    启动子、终止子
（2）使phyA基因能够在腮腺细胞中特异、高效地表达       加热     引物AI和BI的一端有部分碱基序列可以互补配对
（3）-AGCT     可保证目的基因定向插入运载体中，保证目的基因能够正确表达
（4）受精卵    动物受精卵具有全能性