苜蓿夜蛾是番茄的主要害虫之一．某实验室将抗虫基因转入番茄，培育出抗虫番茄．如图是获得转基因番茄的技术流程[注：卡那霉素抗性基因（kanR）作为标记基因，番茄叶片对卡那霉素高

Question

苜蓿夜蛾是番茄的主要害虫之一．某实验室将抗虫基因转入番茄，培育出抗虫番茄．如图是获得转基因番茄的技术流程[注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，番茄叶片对卡那霉素高度敏感]，请据图回答：

（1）构建重组质粒的过程中需要用到的工具酶为___和DNA连接酶；DNA连接酶根据来源分为两类：T₄DNA连接酶和E•coli DNA连接酶．这两种酶作用有所差别：___只能连接双链DNA的黏性末端，而___既可以连接双链DNA的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA的齐平末端．
（2）土壤农杆菌的感染特点是能在自然条件下感染___植物和裸子植物，而对大多数___植物没有感染能力．
（3）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够感染番茄细胞，并将___转移至受体细胞的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到番茄细胞的___上，最终形成转基因植株．
（4）将经过___形成的愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和___的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选出转基因番茄．
（5）用PCR方法检测转基因番茄是否含有目的基因时，需根据___的核苷酸序列设计特异引物，以___为模板进行第一轮扩增．

Answer 1

（1）构建重组质粒的过程中需要用到的工具酶为限制性核酸内切酶（切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒）和DNA连接酶（将目的基因和质粒连接形成重组质粒）；DNA连接酶根据来源分为两类：T₄DNA连接酶和E•coli DNA连接酶，其中E•coliDNA连接酶只能连接双链DNA的黏性末端，而T₄DNA连接酶既可以连接双链DNA的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA的齐平末端．
（2）土壤农杆菌的感染特点是能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力．
（3）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够感染番茄细胞，并将T-DNA 转移至受体细胞的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到番茄细胞的DNA上，最终形成转基因植株．
（4）愈伤组织是经过脱分化过程形成的；由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此将形成的愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和卡那霉素的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选出转基因番茄．
（5）用PCR方法检测转基因番茄是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）的核苷酸序列设计特异引物，以转基因番茄的DNA（或“含目的基因的番茄DNA”）为模板进行第一轮扩增．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶     E•colDNA连接酶    T₄DNA连接酶
（2）双子叶    单子叶
（3）T-DNA    DNA
（4）脱分化    卡那霉素
（5）抗虫基因（目的基因）    转基因番茄的DNA（或“含目的基因的番茄DNA”）