苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌

Question

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示；①为土壤样品。请回答下列问题：

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入_____作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基______(A．影响；B．不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用__________法。
(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于_______；使用______法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_______________。
(3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？
(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？

Answer 1

(1)苯酚   A   稀释涂布平板
(2)④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源   稀释涂布平板法或平板划线   以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)5支洁净培养瓶→分别加入相同培养基(加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支培养瓶内培养基的pH，用苯酚调试使之相等。苯酚是唯一的碳源)→分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种→在相同的适宜条件下培养相同的时间→再用pH试纸检测这5支培养瓶内培养基的pH。苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯酚的能力不同，5支培养瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH不同。用pH试纸检测这5支培养瓶内培养基的pH，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。
(4)培养基灭菌、接种环境灭菌、接种过程无菌操作。