EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成．人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物．

Question

EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成．人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物．其过程如下：请回答下列问题：

（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过___得到单链DNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因．
（2）从供体母鼠的卵巢中获取的卵子需要在体外培养到___期才能与___的精子受精，受精作用完成的标志是___．
（3）①过程构建了基因表达载体，内部包括多个不可缺少的组成部分，其中___能驱动基因的转录．
（4）采用___技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，然后将受精卵移入发育培养液中继续培养，当胚胎发育至___期，向受体母牛进行移植．此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___．
（5）若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用___技术对血液来进行检测．

Answer 1

（1）获取目的基因的方法可通过反转录法，故从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到cDNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因．
（2）卵子需培养到减数第二次分裂中期时才能与获能的精子受精．受精作用完成的标志是雌雄原核融合．
（3）①过程为形成基因表达载体的过程，基因表达载体包括启动子、终止子等，其中启动子为RNA聚合酶结合的部位，能驱动基因的转录．
（4）将重组表达载体导入动物细胞中常采用显微注射技术技术．胚胎移植时应该选择桑椹胚或囊胚进行移植．动物细胞培养的培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质．由于是采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物，因此移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．
（5）检测目的基因是否表达应该采用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）逆转录
（2）减数第二次分裂中期    获能    雌雄原核融合
（3）启动子
（4）显微注射  桑椹胚或囊胚   性别鉴定
（5）抗原-抗体杂交