大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定．回答下列相

Question

大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，在无氧条件下，发酵能将葡萄糖转换成多种有机酸并生成二氧化碳，某研究机构用“滤膜法”对受污染的河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定．
回答下列相关问题：

（1）研究人员向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝水溶液后，装入图甲所示的试管中，再将污水水样滴加进去振荡均匀，适宜条件下培养一段时间后可观察到溶液颜色的变化是___．
（2）图乙中滤膜的孔径应___（“大于”、“小于”或“等于”）大肠杆菌．
（3）制备图乙中牛肉膏蛋白胨固体培养基时，培养基的灭菌方法是___，待培养基冷却至___℃左右时进行倒平板．
（4）为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入___染料，该研究机构通过统计___色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目．理论上他们的统计值要比实际值___，（“偏高”、“偏低”或“相等”） 理由是___．

Answer 1

（1）由题干“在无氧条件下，大肠杆菌通过发酵能将葡萄糖转变为多种有机酸并产生CO₂等气体”，向葡萄糖蛋白胨培养液中加入适量的溴麝香草酚蓝培养一段时间的大肠杆菌，可产生CO₂气体，CO₂可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄．
（2）分析图解可知，实验将待测水样进行过滤，得到的滤膜进行微生物培养，因此水中的大肠杆菌应留在滤膜上，即图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌．
（3）培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板．
（4）伊红美蓝是专一鉴别大肠杆菌的指示剂，为了鉴别大肠杆菌菌落，可向培养基中加入伊红美蓝作为指示剂．在伊红美蓝培养基上，可以鉴定出菌落为黑色的具有金属光泽的大肠杆菌，因此该小组通过统计黑色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目．由于培养基中两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落，因此理论上他们的统计值比实际值偏低．
故答案为：
（1）由蓝变绿再变黄
（2）大于
（3）高压蒸汽灭菌法      50
（4）伊红美蓝     黑色菌落    偏低     两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落