基因工程原理题求答1、当一DNA片段插入pUC18后，在x-gal平板上出现两类菌落，兰色菌落和白色菌落。从白色菌落中分离纯化的质粒经电泳检查，均比原载体DNA分子大；但从兰色菌落随机分离

Question

基因工程原理题求答
1、当一DNA片段插入pUC18后，在x-gal平板上出现两类菌落，兰色菌 落和白色菌落。从白色菌落中分离纯化的质粒经电泳检查，均比原载体DNA分子大；但从兰色菌落随机分离的质粒DNA却有两类，其中一类与载体大小相同，另一类却与白色菌落中分离的质粒大小相同。如何解释这一实验结果? 可设计何种实验证明你的解释是正确的?
2. 现有一BamHI DNA片段， 已知内含有如下限制酶识别位点：PstI, HindⅢ, EcoRI, SalI, KpnI, 它们都只有一个识别位点。一研究者要绘制该片段的上述几种限制酶谱，他手中现有两种克隆载体。其中一种的上述各限制酶识别顺序均集中在一多克隆位点区，而另一载体则分散于整个DNA分子中，他应选择何种载体?为什么?
3、某表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中可溶性表达的基因A，若将外源基因B插入到基因A的3‘ 末端，使之产生可溶性融合蛋白A-B，试设计合理的重组方案。
___起始密码子 A 基因全序列
ATGATCGGGATTCGCTGGGATAAAGTGCACCTCAATATAGCACACGCTTGCAACGCAAAGAGCCCCGATTTCTGTAACCGCCAGCACAAAGATGCGGAACACCCAAAAGTGGCGGCAAACGCCTTCAACCGGATCCCGGGATATCAGCTGAGATCTGCTTTCTAG
终止密码子
___ 起始密码子 B 基因部分序列
TCCCGGGATCCATGCTC.........................CGCTAAGAGGATCCTCCCGGGT
___ 终止密码子
BamHI：G\GATCC BglII：A\GATCT
EcoRV：GAT\ATC EcoRI：G\AATTC
SmaI：CCC\GGG PvuII：CAG\CTG
4、现有一BamHI DNA片段， 已知内含有如下限制酶识别位点：PstI, HindⅢ, EcoRI, SalI, KpnI, 它们都只有一个识别位点。一研究者要绘制该片段的上述几种限制酶谱，他手中现有两种克隆载体。其中一种的上述各限制酶识别顺序均集中在一多克隆位点区，而另一载体则分散于整个DNA分子中，他应选择何种载体?为什么?
快考试了，但找不到这些题的答案，希望大家伸伸援手 谢谢啦O(∩_∩)O哈！

Answer 1

1、α－互补和插入失活
在LacZ—的大肠杆菌中，在有IPTG诱导物和X-gal生色底物的平板培养中，菌落是白色的。若在该细胞中引入pUC质粒，其上有LacZ′，质粒和大肠杆菌DNA可实现α－互补， 表达出β-半乳糖苷酶，可降解生色底物使菌落呈蓝色。
如果在质粒的多克隆位点的某个酶切点上克隆了外源基因，则LacZ′基因受到破坏，便不能再和缺陷型受体菌中生成有活性的β-半乳糖苷酶，因此菌落呈白色。
实验设计自己设计吧。
2、酶谱的原理是：限制性内切酶在DNA上有特异的识别和切割位点，可将DNA切开而得到两个或两个以上的大小不同的片段，这些片段可通过电泳分离并检测其大小。双酶切法酶切图谱构建是使用两种不同的限制性内切酶对同一个DNA分子进行单酶切和双酶切，将所得的片段进行对比组装，对交替区域进行加减以确定酶切位点的相对位置。
所以选择的各限制酶识别顺序载体则分散于整个DNA分子中。
3、要求是在酶切酶联是不能移码这一原则。而且在选择酶切位点具有唯一性。否则会把载体切成很多段。
有一个软件可以用，你把你的序列输进去，他就会显示酶切位点和酶，然后你自己选择。软件是 DNAssist2.2
人工查找很麻烦。
你自己去下载自己找吧（或者叫学长帮你找出来，自己分析）。我没有软件。我也在忙考试。
4、同第二题。