烟草花叶病毒（TMV）是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害．研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因（CP基因）导入烟草并在

Question

烟草花叶病毒（TMV）是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害．研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因（CP基因）导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性．如图是转化烟草植株的培育流程，请回答：

（1）含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行___获得的．在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有___序列．
（2）将CP基因导入土壤农杆菌质粒的___，其原因是___．
（3）含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前，对烟草叶的处理要求是___．
（4）共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须___有光或避光）．
（5）在配置诱导芽、根的培养基时，要注意在不同的培养阶段需调整___的比例．最终检测转基因是否成功，可用___方法进行检测．

Answer 1

（1）以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，故含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行反转录获得的．在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有互补序列，否则两引物会互补配对形成双链．
（2）由于土壤农杆菌T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中，故将目的基因CP基因导入土壤农杆菌质粒的T-DNA区．
（3）含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前，对烟草叶的处理要求是无菌，并切成小片．
（4）共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须避光，形成叶绿体时则需要光照．
（5）生长素与细胞分裂素比值较高时有利于生根，较低时有利于生芽，在配置诱导芽、根的培养基时，要注意在不同的培养阶段需调整生长素和细胞分裂素的比例．最终检测转基因是否成功，可用抗原-抗体杂交方法进行检测形成的蛋白质．
故答案为：
（1）反转录   互补
（2）T-DNA区    T-DNA可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物染色体的DNA中
（3）无菌，并切成小片
（4）避光
（5）生长素和细胞分裂素     抗原-抗体杂交（或抗病接种实验）