回答下列有关基因工程的问题(10分)最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体（见图）。AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关

Question

回答下列有关基因工程的问题(10分)最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体（见图）。AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏复制激活基因E，所以，AAV感染细胞后不会复制，对人体安全。当人体细胞同时感染其他DNA病毒（含有基因E）后，会激活复制、表达，形成病毒粒子（含DNA和衣壳），病毒粒子具有侵染能力。AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子。

血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子，导致机体出血。目前血友病的临床治疗主要有两种基因疗法，一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内，补充凝血因子；二是用含目的基因的重组病毒感染患者，使患者获得病毒直接提供的凝血因子。

1.在质粒重组之前需获取大量的目的基因等，实验室最常见的方法是（写中文全称）            。

2.过程①②需要限制酶外，还需要            酶。

3.重组AAV中去除了基因rep、cap，此举的目的是            ；重组AAV转染细胞产生病毒粒子，需要人工重组辅助质粒，这是因为            。

4.比较两种基因治疗法，说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点：            。

5.实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明            。

6.病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒，就需要检验、提纯，检验可以用酶切结合电泳法。已知腺相关病毒（AAV）与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图30所示，两种酶分开切的电泳图如图所示。

则用这两种酶作用于重组AAV，电泳图正确的是            。

 

Answer 1

(10分)

1.聚合酶链反应

2. DNA连接

3.重组AAV不能在人体大量复制，提高安全性，并保证AAV能结合较大目的基因片段  辅助质粒能提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因

4.凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射；病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射。2分

5.生物共用一套遗传密码子

6.B  2分