苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在若降解苯酚的微生物．某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，所以人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌

Question

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在若降解苯酚的微生物．某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，所以人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品，请回答下列问题：

（1）②中培养菌株的选择培养基中应加______作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基______（A．影响；B．不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用______法．
（2）④为对照、微生物在④中不生长、在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于______；使用______法可以在⑥上获得单菌落．采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？______
（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？______
（4）实验过程中如何防止其它微生物的污染？______．

Answer 1

（1）选择分解苯酚的菌的培养基是以苯酚为唯一碳源的培养基；苯酚是唯一的碳源，当苯酚消耗尽时，菌株因缺少碳源而不能继续繁殖，所以②中不同浓度的碳源A影响细菌数量；一般采用稀释涂布平板法来测定②中活菌数目．
（2）④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基的中加入苯酚作为碳源；使用释涂布平板法或平板划线法可以在⑥上获得单菌落．采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
（3）取5支洁净培养瓶→分别加入相同培养基加等量的苯酚，→分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种→在相同的适宜条件下培养相同时间→再检测这5支瓶内培养基的苯酚的含量，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小．
（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵：a．实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和和消毒；
b．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；
c．为避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
d．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触．
故答案为：
（1）苯酚　A　平板菌落计数（活菌计数或菌落计数）
（2）④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚为唯一碳源　平板分离（稀释涂布平板或平板划线分离）　避免培养过程产生的水分影响微生物的生长
（3）用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，测定培养液中苯酚含量
（4）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作