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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的,此技
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Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的___,此技术属于___工程范畴.
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其___中分离出ES细胞.培养ES细胞时,为满足细胞代谢的需要,可在培养基中加入的天然成分是___.
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的___设计引物,利用___技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有___酶的酶切位点.
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的___,用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验.
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的___,此技术属于___工程范畴.
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其___中分离出ES细胞.培养ES细胞时,为满足细胞代谢的需要,可在培养基中加入的天然成分是___.
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的___设计引物,利用___技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有___酶的酶切位点.
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的___,用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验.
▼优质解答
答案和解析
(1)核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中,所以实验前要去除卵母细胞的细胞核.此技术属于细胞工程范畴.
(2)重组胚胎培养到囊胚期时,可从其内细胞团中分离出ES细胞.培养ES细胞时,为满足细胞代谢的需要,可在培养基中加入的天然成分是动物血清.
(3)设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计.Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的,所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点.
(4)基因表达的产物是蛋白质,所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)细胞核 细胞
(2)内细胞团 动物血清
(3)脱氧核苷酸序列 PCR HindⅢ和PstⅠ
(4)蛋白质
(2)重组胚胎培养到囊胚期时,可从其内细胞团中分离出ES细胞.培养ES细胞时,为满足细胞代谢的需要,可在培养基中加入的天然成分是动物血清.
(3)设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计.Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的,所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点.
(4)基因表达的产物是蛋白质,所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)细胞核 细胞
(2)内细胞团 动物血清
(3)脱氧核苷酸序列 PCR HindⅢ和PstⅠ
(4)蛋白质
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