找资料弄了一个CTAB法提菌液DNA,但一直无结果,哪位大神帮我看一下实验方案有什么问题木有,欢迎指正!试剂：1）CTAB提取液（PH8.0）：2%CTAB2g,1.4MNacl,0.02MEDTA0.745g,0.1MTris-Hcl1.21g,1.4mol／LNa

Question

找资料弄了一个CTAB法提菌液DNA,但一直无结果,哪位大神帮我看一下实验方案有什么问题木有,欢迎指正!
试剂：
1）CTAB 提取液（PH 8.0）：2% CTAB2 g,1.4M Nacl,0.02M EDTA 0.745 g,0.1M Tris-Hcl1.21 g,1.4 mol／L NaCI 8.18 g,加水至100 mL,高压灭菌备用.即称取CTAB 2 g加蒸馏水40ml,加1M Tris-Hcl（PH8.0）10ml,0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28ml,待CTAB溶解后用蒸馏水定容到100ml
2）1M Tris-Hcl（PH 8.0）100 ml:12.11g Tris碱；ddH2O ,80ml；HCl,4.9 ml三者混匀充分溶解后,滴加浓盐酸调PH至8.0,定容至100ml
3）0.5M EDTA（PH 8.0） 100ml：在80ml水中加入18.01g EDTANa2.2H2O搅拌溶解,用NaOH调PH至8.0（约2gNaOH颗粒）,定容至100ml
4）5M NaCl 100ml：称取29.22g NaCl ,用ddH2O定容到100ml
5）3M NaAc 10ml：称取2.46g NaAc,用ddH2O定容到10ml
药品：Tirs碱、浓盐酸、EDTANa2.2H2O、NaOH、NaCl、CTAB、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、NaAc、恒温水浴、离心机、离心管
1、 取1ml菌液于2.0ml离心管中,加入1ml CTAB裂解液.混匀后65℃水浴约15分钟,每隔5分钟取出摇匀一次；
2、 冷却后,12000rpm离心3min,离心结束后移出600μl上清至一无菌2.0ml离心管中,加入600ul 的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12),振荡混匀,-20℃放冰箱15min,10000rpm,离心5min；
3、 吸上清,装入一新的EP管,加入等体积氯仿：异戊醇（24:1=576:24）,重新抽提,直至离心后水相和有机相之间不再有白色沉淀,12000rpm.离心5min；
4、 吸上清,转入一新的离心管中,加入0.1倍体积的NaAc（3mol/l）,在漩涡混合器上混匀后加入1.5倍体积（加盐之后计算的体积）-20℃预冷的无水乙醇,混匀后置于-20℃30min,10000rpm,5min弃上清,
9、向离心管中加入冰70%的乙醇洗涤2-3次,置于吸水纸上倒置晾干
10、加入TE缓冲液（50ul）溶解

Answer 1

之间的类似白色膜的水相和氯仿,然后最后提取也不是很干净的,也有类似的杂质蛋白. 1,你就可以重新提取一次,肯定会减少杂质吸那种小心翼翼,不都吸,动作轻柔点,不张狂,或杂质会不吸. 刀片,冷冻在液氮中,每个仪器的速度...