（2012•盐城二模）研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂-内皮抑素，它能有效地抑制血管增生．下面是通过转基因技术获得内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：（1）

Question

（2012•盐城二模）研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂-内皮抑素，它能有效地抑制血管增生．下面是通过转基因技术获得内皮抑素的方法，请分析回答下列问题：
（1）从肝细胞中分离出RNA，经______过程获得cDNA，再通过______扩增内皮抑素基因．
（2）扩增的目的基因与PUC18质粒（如图所示）都用EcoRI和BamHI进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒．双酶切避免了目的基因与载体间的______连接，提高了重组质粒的比例．
（3）大肠杆菌pUC18质粒上的LacZ基因可表达出B-半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被B-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；反之，则形成白色菌落．由此推知，选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入______物质．成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成______色的菌落，原因是______．
（4）从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物．将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37℃培养．将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72h后在显微镜下观察细胞存活情况并______，实验结果 如表所示．结果说明______．

粗提表达产物浓度（μg/ml）	0	2	4	6	8	10
活的内皮细胞数目（x100）	12	6	2	1	0.5	0.5

Answer 1

（1）从肝细胞中分离出相应的RNA，经反转录（或逆转录）获得内皮抑素基因，再利用PCR技术进行体外扩增，以获得更多的目的基因．（2）双酶切后，目的基因两端的黏性末端不同，被切开的运载体两端的黏性末端也不同，这...