我做PCR扩增后溶液大部分蒸发了,按理说体积小于30uL不能送去测序,PCR失败,我能不能往里面加ddH2O?水蒸发后里面还有目的基因吗?我能不能加水呢?为什么?

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我做PCR扩增后溶液大部分蒸发了,按理说体积小于30uL不能送去测序,PCR失败,我能不能往里面加ddH2O?
水蒸发后里面还有目的基因吗?我能不能加水呢?为什么?

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答案和解析

目的基因可能有,但是不会很多.可以加水,但是好像没有必要啊.
PCR过程中水量大部分蒸发后反应体系中的各成分的浓度有所改变,最严重的就是pH值的变化,可能会导致酶的活性降低或者失活,所以有可能你目的基因扩增的量很少,或者根本没有.我不明白你加水做什么用的?测序其实是要求目的基因在某一浓度之上时总量必须够,对溶解的水没有多少要求.举个简单例子,如果测序需要1ug的量,如果你样品的浓度在100ng的话,15ul的量就够他们测序了.相反,如果你样品的浓度特别低,即使你送她一吨,他也无法测序,因为浓度不够.所以跟加水与否关系不大.其实你可以测序,现在测序公司测不出结果不收费的.

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