红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细

Question

红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）期间要生产流程如图
（1）图中①所指的是______技术．
（2）图中②所指的物质是______，③所指的物质是______．
（3）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生______末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______（相同，不同）粘性末端的限制酶．
（4）构建的表达载体含有人EP0基因及其启动子、______、______等，其中启动子是______酶识别和结合的位点．
（5）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______．
（6）将构建好的基因表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞系常采用______法．如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上．
（7）检测 rhEPO的活性需用抗rhEPO单克隆抗体．分泌单克隆抗体的______细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成单克隆抗体的优点是______并可大量制备．

Answer 1

（1）由图可知：①过程是PCR扩增目的基因技术．PCR扩增技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，可以在短时间内大量扩增目的基因．
（2）②过程是以反转录法获取目的基因，反转录法是以mRNA为模板，以脱氧核糖核苷酸为原料在酶的催化下生成DNA的过程．是一种人工合成目的基因的方法．由图可知最终产物是rhEPO，由此可推知，③是rhEPO．
（3）用不同的限制酶切割可形成黏性末端，也能形成平末端，用DNA连接酶连接时，需要相同的黏性末端，所以限制酶选择时应选择产生相同黏性末端的限制酶．
（4）基因表达载体由启动子、终止子、标记基因和目的基因组成．启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位．
（5）检测目的基因是否转录出mRNA，方法是用标记的目的基因作探针与mRNA杂交．既分子杂交技术．
（6）目的基因导入动物细胞常用显微注射法，目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，利用农杆菌的Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上．
（7）单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生，单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高并可大量制备．
故答案为：
（1）PCR  
（2）mRNA    rhEPO
（3）平   相同
（4）终止子   标记基因    RNA聚合酶
（5）分子杂交技术
（6）显微注射   T-DNA   染色体的DNA
（7）杂交瘤    特异性强、灵敏度高