绿色荧光蛋白（GFP）能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转

Question

绿色荧光蛋白（GFP）能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能．下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）图中通过过程①②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒．限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成黏性末端的过程．___（只写出切割后形成的部分即可）
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？___，理由是___．
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是___．
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是___．
获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是___．
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：___（用序号表示）．
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列   ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）                  ④表达出蓝色荧光蛋白．

Answer 1

（1）①限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，则图2中被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端为：、．
②酶Ⅰ和酶Ⅱ识别序列不同，但切割后产生的黏性末端相同，因此在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接．
（2）将重组质粒导入动物细胞时，采用最多也最有效的方法是 显微注射法．
（3）标记基因的作用是鉴定受体细胞中是否含有目的基因．获得的转基因克隆猪，可以解决医学上供体器官不足的难题，同时抑制抗原决定基因的表达或除去抗原决定基因，也可以避免发生免疫排斥反应．
（4）蛋白质工程的操作过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）→基因表达合成相应的蛋白质．因此采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：②①③④．
故答案为：
（1））①
②可以连接　由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）
（2）显微注射法
（3）鉴定受体细胞中是否含有目的基因   供体器官不足和免疫排斥       
（4）②①③④