测定生物组织中ATP的含量，常常利用“荧光素—荧光素酶生物发光法”。该方法的主要步骤如下：①将所测生物组织研磨后沸水浴10分钟，然后冷却至室温；②离心处理后取一定量的上清液

Question

测定生物组织中ATP的含量，常常利用“荧光素—荧光素酶生物发光法”。该方法的主要步骤如下：①将所测生物组织研磨后沸水浴10分钟，然后冷却至室温；②离心处理后取一定量的上清液放人分光光度计（测定发光强度的仪器）反应室内，并加人适量的荧光素和荧光素酶，在适宜条件下进行反应，③记录发光强度并计算ATp含量。分析上述实验步骤并回答问题：

（1）荧光素在            和ATP等物质的参与下可进行反应发出荧光。根据发光强度可以计算出生物组织中ATP的含量，原因是：                                          。

（2）分光光度计反应室内必须控制两个影响酶活性的反应条件，分别是          和pH，维持溶液pH的相对稳定时常常使用           。分光光度计反应室内发生的能量转换是            。

（3）为了节省实验中荧光素酶的用量，科研人员测得荧光素酶浓度与发光强度的关系如下图所示。

结果表明，测定ATP时，图中      点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同，但发光强度不再提高，此时的限制因素有                             。

（4）利用“荧光素—荧光素酶生物发光法”可检测熟食食品中细菌的ATP含量，进而测算出细菌数量以判断食品的污染程度。做出这种判断的理由是：每个细菌细胞中ATP的含量               。

 

Answer 1

（1）荧光素酶    发光强度与ATP的含量成正比

（2）温度   （磷酸）缓冲液    化学能→光能

（3）e   荧光素浓度、ATP浓度

（4）大致相同且相对稳定