什么叫基于细胞的elisa（cell-basedelisa）?方法和应用.

Question

什么叫基于细胞的elisa（cell-based elisa）?方法和应用.

Answer 1

基于细胞的elisa,就是说它能测定完整的、经过固定的细胞中磷酸化蛋白及总蛋白水平,而无需裂解细胞.
作为一种全新的ELISA技术,它有两个最突出的优点：1）不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养,待检测的时候,将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可.这样就避免了抽提蛋白时,由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况.同时不用包被微孔板,简化了实验流程,有助于提高效率.2）可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗,然后再加入不同的二抗,加入两种荧光底物,检测两个波长.同时检测两种蛋白的好处是显而易见的,可以减少工作量,此外还可以满足一些特殊的实验需要,例如,需要测定某个蛋白的磷酸化比例,就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量,这两个测定在同一次实验进行,有助于消除实验误差,得到更为精确的实验结果.
一般是购买现成的试剂盒,进行使用.