pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示．图中PRPL是启动子，rrnB是基因转录终止信号，Ampr是

Question

pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示．图中P_RP_L是启动子，rrnB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ等为各种限制性内切酶．请据图回答下列有关问题：

（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有___、___．
（2）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割．单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段．若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为___，C的两个切割位点与A点的最距离分别为___、___．
（3）P_R和P_L都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是___．温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活．促进工程菌目的基因表达的诱导温度为___．

Answer 1

（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有具有多个限制性内切酶的切割位点（便于目的基因的插入）、标记基因（便于鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞）．
（2）单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，这说明该质粒上有一个A酶切割位点、一个B酶切割位点、2个C酶切割位点．A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，说明A和C酶的一个切点之间的长度为500bp，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，说明B和C酶的一个切点之间的长度为250bp，若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为500+250=750bp，C的两个切割位点与A点的最距离分别为500bp、1000bp．
（3）P_R和P_L都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是保证目的基因的高水平表达（高效转录）．温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活，因此要促进工程菌目的基因表达就要使CIts蛋白失活，即促进工程菌目的基因表达的诱导温度为42℃．
故答案为：
（1）多个限制性内切酶的切割位点      标记基因
（2）750bp     500bp     1000bp
（3）保证目的基因的高水平表达（高效转录）     42℃