科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗．请回答下列问题：（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应

Question

科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗．请回答下列问题：
（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在___ 的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列___（填“相同”或“不同”）．
（2）通常采用PCR技术扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___，在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是___．
（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入到___上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入到植物细胞中的___上．要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有___．
（4）研究发现，如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将大大延长，科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是___．

Answer 1

（1）获取目的基因的方法有反转录法，即可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在逆转录酶的作用下合成双链cDNA片段．获得的cDNA片段只包含基因的编码区，没有非编码区，因此与结核杆菌中该基因碱基序列不同．
（2）通常采用PCR技术扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，在操作步骤中需要加热至90-95℃的目的是目的基因DNA受热变性解链为单链．
（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入到植物细胞中的染色体的DNA上．要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有MPT64蛋白．
（4）研究发现，如果将MPT64蛋白20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将大大延长，科学家可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是蛋白质工程．
故答案为：
（1）逆转录酶        不同
（2）引物       目的基因DNA受热变性解链为单链
（3）Ti质粒的T-DNA      染色体的DNA       MPT64蛋白
（4）蛋白质工程