绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具有抗感染性．烟草是重要的经济作物，由于TMV的感染会导致大幅度减产．研究人员利用转基因技术培育

Question

绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV 蛋白，叶片对 TMV具有抗感染性．烟草是重要的经济作物，由于 TMV 的感染会导致大幅度减产．研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如图所示．

（1）科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因．图中过程①表示______，获得的DNA必须在两侧添加______和______．
（2）过程③构建的重组Ti 质粒时，必须使用______和______两种工具酶．
（3）由图分析，在过程③构建的重组Ti 质粒上应该含有卡那霉素抗性基因作为______，重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是______．
（4）在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外，还必须添加______，以保证受体细胞能培养成再生植株．
（5）过程⑥可采取______的方法，检测植株是否合成了抗TMV蛋白．在个体水平的鉴定过程中，可通过的______方法来确定植株是否具有抗性．

Answer 1

（1）抗TMV基因转录的RNA可以通过逆转录合成目的基因．获得的DNA必须在两侧添加启动子和终止子．
（2）过程③构建的重组Ti质粒时，必须使用限制性核酸内切酶（限制酶）切割质粒使其具有与目的基因相同的黏性末端，之后再用DNA连接酶将目的基因和质粒连接成重组质粒．
（3）由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有卡那霉素抗性基因是标记基因，可以检测受体细胞是否有目的基因．受体细胞是植物细胞时，可以用农杆菌转化法重组Ti质粒导入烟草体细胞．
（4）在过程⑤培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外，决定植物脱分化和再分化的关键因素是：植物激素的种类和比例．特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要，以保证受体细胞能培养成再生植株．
（5）检测植株是否合成了抗TMV蛋白，过程⑥可采取抗原-抗体杂交的方法．在个体水平的鉴定过程中，可通过的接种烟草花叶病毒方法来感染烟草花叶病毒，来确定植株是否具有抗性．
故答案为：
（1）逆（反）转录   启动子   终止子
（2）限制性核酸内切酶（限制酶）     DNA连接酶
（3）标记基因    农杆菌转化法
（4）植物激素（生长素和细胞分裂素）
（5）抗原-抗体杂交   接种烟草花叶病毒