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近几十年来,植物基因工程取得相当大的进展,科学家将药用蛋白转向植物生产,研究出了用转基因马铃薯生产人的血清白蛋白的方法.如图表示EcoRⅠ、BamHⅠ两种限制酶在质粒上的切割位

题目详情
近几十年来,植物基因工程取得相当大的进展,科学家将药用蛋白转向植物生产,研究出了用转基因马铃薯生产人的血清白蛋白的方法.如图表示EcoRⅠ、BamHⅠ两种限制酶在质粒上的切割位点,两种酶识别和切割位点见表.回答下列相关问题.
限制酶 识别序列和切割位点
EcoRⅠ
GAATTC
BamHⅠ
GGATCC
(1)该工程中适宜用来切割质粒的限制酶是___,原因是___.
(2)获取血清白蛋白基因可以利用反转录法构建的___文库中获取,若利用PCR技术扩增血清蛋白基因,设计引物序列的主要依据是___,还需要在引物的一端加上___序列,以便于后续的剪切和连接.
(3)将目的基因和质粒进行连接后,需先用___处理农杆菌以便将基因表达载体导入马铃薯细胞,筛选含有目的基因的细胞需在培养基中添加___.
(4)从含有血清白蛋白基因的马铃薯细胞中提取血清白蛋白,需通过___过程培养到愈伤组织,从其中提取.
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答案和解析
(1)分析图解可知,质粒上含有EcoRⅠ、BamHⅠ两种限制酶切割位点,而用EcoRⅠ切割会将质粒上的两个抗性基因都破坏,因此该工程中适宜用BamHⅠ来切割质粒.
(2)获取血清白蛋白基因可以利用反转录法构建的cDNA文库中获取.若利用PCR技术扩增血清蛋白基因,设计引物序列的主要依据是干扰素基因两端的部分核苷酸序列,还需要在目的基因上设置BamHⅠ限制酶的切割位点,因此需要在引物的一端加上GGATCC序列,以便于后续的剪切和连接.
(3)将目的基因和质粒进行连接后,需先用Ca2+处理农杆菌以便将基因表达载体导入马铃薯细胞;由(1)小题可知,标记基因为抗氨苄青霉素基因,因此筛选含有目的基因的细胞需在培养基中添加氨苄青霉素.
(4)从含有血清白蛋白基因的马铃薯细胞中提取血清白蛋白,需通过脱分化过程培养到愈伤组织,从其中提取.
故答案为:
(1)BamHⅠ用EcoRⅠ切割会将质粒上的两个抗性基因都破坏
(2)cDNA  干扰素基因两端的部分核苷酸序列GGATCC
(3)Ca2+   氨苄青霉素
(4)脱分化
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