想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什

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想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案
想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什么细节要考虑到?比如筛选标记,启动子,密码子偏好,终止子/加尾信号,CDS,是否需要报告基因等,但具体操作起来没有以前师兄师姐的指导感觉很难,请各位高手有实验操作步骤的不吝赐教!

▼优质解答

答案和解析

用质粒好像不是很稳定,最好能整合到基因组上,可以用类似温和性病毒的载体,报告基因应该有,最好使用绿色荧光蛋白或者红色荧光蛋白,因为是诱导,所以需要可诱导的启动子,如果你表达的蛋白需要纯化,最好是加一个尾巴,用于纯化,否则应该不需要,筛选标记可有可无的,因为有红色荧光蛋白就可以用极限稀释法来构建单克隆细胞株了.
一点浅见仅供参考

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