hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能．科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在

Question

hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能．科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在肾小管上皮细胞中表达，以动态观察hNaDC3在肾小管上皮细胞中的定位情况，为进一步研究hNaDC3的生理功能奠定基础．研究主要过程如图（实验中使用的限制酶SacⅠ的识别序列是GAGCT^↓C，限制酶SacⅡ识别序列是CCGC^↓GG）．请分析回答：

（1）与PCR相比，过程①需要的特有的酶是___，应从人体___（器官）的组织细胞中获得模板RNA．
（2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是___．过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是___．
（3）过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用___（技术）分离、筛选重组表达载体．
（4）显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光．根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是___．
（5）研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强．这一实验结果可以说明___．

Answer 1

（1）分析图解，图中过程①表示通过反转录法合成目的基因，因此与PCR相比，过程①需要的特有的酶是逆转录酶（或反转录酶）．由于基因的选择性表达，只能从人体肾脏的组织细胞中获得模板RNA．（2）根据题意可知，“限...