自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途．研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究．请回答下列问题：（1）在

Question

自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途．研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究．
请回答下列问题：
（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是___（填序号）
①酒精灯　②接种环　③高压蒸汽灭菌锅　④棉塞
（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于___培养基上进行筛选．
（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是___．
（4）涂布培养四天后，可通过观察___的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类．
（5）为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如表：

	甲菌	乙菌	丙菌	丁菌
菌量（个/mL）	2.1×105	2.5×105	1.8×105	2.0×105
含氮量（K）	3.32	4.38	5.34	5.32

①培养过程中需不断振荡的目的是___．
②可以采用___方法对固氮菌进行计数，假设计数室长和宽均为1mm，深0.1mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为___个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应___．
③由上述结果可知，___菌的固氮效率最高．

Answer 1

（1）平板培养基配制的基本流程为：：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节PH→分装→灭菌→倒平板→（冷却后）倒置平板，不需要接种环接种．故选：②．
（2）对微生物进行分离和计数，应该用稀释涂布平板法．自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，所以培养基中不需要加氮源．
（3）由于培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，因此在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多．
（4）用肉眼来观察并鉴定细菌的依据是菌落的形态、大小和颜色．因此可通过应用固体培养基，观察菌落形态的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类．
（5）①为了让固氮菌与培养液充分接触，在培养过程中需不断振荡．
②对固氮菌进行计数可以采用抽样检测方法，假设计数室长和宽均为1mm，深0.1mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为=7×400×10⁴×10=2.8×10⁸个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应对培养液稀释后计数．
③由上述结果可知，丙菌数量最少，但固氮量最多，因此可判断出丙菌的固氮效率最高．
故答案为：
（1）②
（2）缺氮
（3）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果
（4）菌落
（5）①让固氮菌与培养液充分接触　②抽样检测　2.8×10⁸　对培养液稀释后计数　③丙