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关于质粒亚克隆的一些问题有一个以前师兄留下来的质粒,不知道是什么载体的,只知道是HA标签,现在因为想用它做GST-pulldown,所以要把质粒克隆到GST载体上,预计是使用两种酶进行双酶切,本人
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关于质粒亚克隆的一些问题
有一个以前师兄留下来的质粒,不知道是什么载体的,只知道是HA标签,现在因为想用它做GST-pull down,所以要把质粒克隆到GST载体上,预计是使用两种酶进行双酶切,本人几乎没怎么做过克隆,所以想请教一下,具体细节步骤应该要怎么做?
PS：需要设计引物先PCR再酶切?还是用选定的两种酶直接把原质粒来进行酶切?
有一个以前师兄留下来的质粒,不知道是什么载体的,只知道是HA标签,现在因为想用它做GST-pull down,所以要把质粒克隆到GST载体上,预计是使用两种酶进行双酶切,本人几乎没怎么做过克隆,所以想请教一下,具体细节步骤应该要怎么做?
PS：需要设计引物先PCR再酶切?还是用选定的两种酶直接把原质粒来进行酶切?
▼优质解答
答案和解析
一般实验室常用的载体,都是用固定的常用双酶切切割后将基因连进去的,所以你可以资讯师兄是用什么内切酶位点构建的.
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