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有A ,B两种细胞,A细胞比B细胞多表达一种 蛋白质X,如何获得蛋白质X的cDNA 最好是多种方法。
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有A ,B两种细胞,A细胞比B细胞多表达一种 蛋白质X,如何获得蛋白质X的cDNA
最好是多种方法。
最好是多种方法。
▼优质解答
答案和解析
差式筛选法
首先提纯A B细胞分别取得A、B的总rRNA,然后全部转成cDNA .将B细胞的cDNA 进行荧光染色,或者生物素染色.然后将B细胞的cDNA 与A细胞的cDNA 进行原位杂交.
因为AB两种细胞表达的蛋白质几乎都一样,只有极少数几种蛋白质不一样,那么他们的rRNA反转录的cDNA 也差不多一样,只有少数不一样,其中包括蛋白质x.当两种细胞的cDNA 原位杂交后,A细胞cDNA 中没有与B细胞杂交的就是那几种B细胞中没有的蛋白质的cDNA .将这几种cDNA 提出来,转录出蛋白质,在对这些蛋白质进行检测,确定哪个是蛋白质x,那么转录它的cDNA 就是蛋白质x的cDNA .
反转录法
如果可以直接提纯蛋白质x,利用一下仪器可以测定出它的一部分氨基酸序列,根据这些序列反推出DNA序列.将这些DAN序列制作出DNA探针与A细胞的总cDNA 进行杂交,能够与DNA探针反应的就是蛋白质x的cDNA .
首先提纯A B细胞分别取得A、B的总rRNA,然后全部转成cDNA .将B细胞的cDNA 进行荧光染色,或者生物素染色.然后将B细胞的cDNA 与A细胞的cDNA 进行原位杂交.
因为AB两种细胞表达的蛋白质几乎都一样,只有极少数几种蛋白质不一样,那么他们的rRNA反转录的cDNA 也差不多一样,只有少数不一样,其中包括蛋白质x.当两种细胞的cDNA 原位杂交后,A细胞cDNA 中没有与B细胞杂交的就是那几种B细胞中没有的蛋白质的cDNA .将这几种cDNA 提出来,转录出蛋白质,在对这些蛋白质进行检测,确定哪个是蛋白质x,那么转录它的cDNA 就是蛋白质x的cDNA .
反转录法
如果可以直接提纯蛋白质x,利用一下仪器可以测定出它的一部分氨基酸序列,根据这些序列反推出DNA序列.将这些DAN序列制作出DNA探针与A细胞的总cDNA 进行杂交,能够与DNA探针反应的就是蛋白质x的cDNA .
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