核酸凝胶电泳实验需要注意什么

Question

核酸凝胶电泳实验需要注意什么

Answer 1

大多情况下,加样时不必更换枪头,可在阴极槽中反复吸打电泳缓冲液清洗,但对Southern 印迹转移和需回收DNA时,应每个样品使用新的枪头,以避免样品交叉污染.
2、上样缓冲液不仅提高样品的密度,使样品均匀沉到样孔底,还使样品带色,便于上样,估计电泳时间和判断电泳位置.
3、EB是一种强烈诱变剂并有中度毒性,应戴手套操作,对于含有EB的溶液也不应直接倒下水道,用后妥善净化处理：EB含量大于0.5μg/ml溶 液先用水将EB浓度稀释至0.5μg/ml以下,每100ml溶液加入100mg活性碳,不时轻轻摇荡混匀,室温放置1小时,滤纸过滤将活性碳与滤纸密封在塑料袋中作为有害废物丢弃.或用专用一次性染料清除袋（Gene有限公司）吸附过夜,再焚烧袋子即 可.
4、应在暗箱窗口观察结果,避免紫外线操作者的损伤.
5、电泳过程中,EB向阴极移动（与DNA相反）,延长电泳时间,EB会从凝胶中迁移出来,从而使小片段DNA难于检测,可将凝胶浸在 0.5μg/ml EB溶液中重新染色后检测.
6、加样孔的加样量依DNA样品中片段的数量及大小而定,通常对0.5cm宽的加样孔,DNA上样量在0.0.5μg即可有良好的观察效果.如 样品为酶切产物（由大小不同的DNA片段组成）,每孔加20~30μg DNA也不致明显影响分辨率.
7、小的凝胶——微型凝胶和中型凝胶的电泳一般比大的凝胶要快,常常用于快速分析.当选择微型或中型凝胶装置时要考虑凝胶槽盛装缓冲液的体积,小胶 通常要在高压下电泳（>10V/cm）,所以选择一个相对较大的缓冲液槽比较有利.
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