我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质．如图为培育转基因水稻流程示意图，请回答下列问

Question

我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质．如图为培育转基因水稻流程示意图，请回答下列问题：

（l）铁结合蛋白基因来自菜豆，且基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用 ___法获得此目的基因．
（2）构建重组Ti质粒时，通常要用分别 ___切割 ___和 ___．
（3）将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得 ___．
（4）为研究外源基因的遗传方式，将T₀代植株上收获的种子种植成T₁代株系，检测各单株的潮霉素抗性．在检测的多数T₁代株系内，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，此结果说明外源基因的遗传符合 ___定律．有少数T₁代株系的所有植株都表现为对潮霉素敏感，但其体内能检测到铁结合蛋白基因，造成这一结果最可能的原因是 ___．

Answer 1

（1）获取目的基因的方法有三种：①从基因文库中获取；②利用PCR技术扩增；③人工合成（化学合成）．如果基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用化学合成法获得此目的基因，再用PCR技术进行扩增．
（2）构建重组质粒的过程中，通常要用同一种限制酶分别切割质粒和含目的基因的DNA片段，使它们产生相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接成重组质粒．
（3）质粒上的标记基因为潮霉素抗性基因，因此通过培养基2的筛选培养，可以获得含有重组质粒或抗潮霉素的愈伤组织．
（4）由于在检测的多数T₁代株系内，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，所以外源基因的遗传符合基因的分离定律．有少数株系的所有植株都表现为对潮霉素敏感，但其体内能检测到铁结合蛋白基因，造成这一结果最可能的原因是潮霉素抗性基因没有表达或潮霉素抗性基因丢失．
故答案为：
（1）化学合成
（2）限制性核酸内切酶  含目的基因的DNA片段   质粒
（3）含有重组质粒（有潮霉素抗性）的愈伤组织
（4）基因分离   潮霉素抗性基因没有表达或潮霉素抗性基因丢失