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sephadexg―25柱层析脱盐成功的关键有哪些
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sephadexg―25柱层析脱盐成功的关键有哪些
▼优质解答
答案和解析
首先你要弄清楚这个填料的性质
Sephadex是由环氧氯丙烷和葡聚糖交联制备而成的
G-25是其中一种型号,其他还有G-10,G-50等
Sephadex G-25主要被推荐用于还有球蛋白的组群分离.这种填料用于从分子量大于5000的分子中去除盐和其他小污染物非常有效.
Sephadex G-25根据填料颗粒的大小还分成四种分别是超级粉末,粉末,中等粗和粗.颗粒的大小决定了流速和可以上样的最大样品体积.越小的颗粒,柱效越高,但是会产生更高的操作压力,需要运行的更加缓慢.
使用脱盐柱的过程中,绝大多数蛋白进行去盐或者缓冲液交换回收率大于95%
需注意为了阻止可能的离子相互作用,在脱盐过程和最终样品缓冲液中,推荐使用低盐浓度（20mM NaCl）.如果必须避免出现氯化钠,可以使用挥发性的缓冲液,比如100mM的乙酸胺.
样品需要完全溶解,高速离心或者过滤去除颗粒物质.缓冲液需要去除气泡,避免柱子中引入气泡.
一般即使样品浓度很高（＞50mg/ml）也不会影响分离效果.
如果有条件,尽量使用带有紫外和电导监控的层析系统,方便样品上样的优化.精准监控洗脱峰和盐峰.如果电导不能监控,又需要完全回收脱盐样品,上样体积应控制在柱体积的15%~20%之间
Sephadex是由环氧氯丙烷和葡聚糖交联制备而成的
G-25是其中一种型号,其他还有G-10,G-50等
Sephadex G-25主要被推荐用于还有球蛋白的组群分离.这种填料用于从分子量大于5000的分子中去除盐和其他小污染物非常有效.
Sephadex G-25根据填料颗粒的大小还分成四种分别是超级粉末,粉末,中等粗和粗.颗粒的大小决定了流速和可以上样的最大样品体积.越小的颗粒,柱效越高,但是会产生更高的操作压力,需要运行的更加缓慢.
使用脱盐柱的过程中,绝大多数蛋白进行去盐或者缓冲液交换回收率大于95%
需注意为了阻止可能的离子相互作用,在脱盐过程和最终样品缓冲液中,推荐使用低盐浓度（20mM NaCl）.如果必须避免出现氯化钠,可以使用挥发性的缓冲液,比如100mM的乙酸胺.
样品需要完全溶解,高速离心或者过滤去除颗粒物质.缓冲液需要去除气泡,避免柱子中引入气泡.
一般即使样品浓度很高（＞50mg/ml）也不会影响分离效果.
如果有条件,尽量使用带有紫外和电导监控的层析系统,方便样品上样的优化.精准监控洗脱峰和盐峰.如果电导不能监控,又需要完全回收脱盐样品,上样体积应控制在柱体积的15%~20%之间
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