虫草中的超氧化物歧化酶（PSSOD）具有抗衰老作用．研究人员培育了能合成PSSOD的转基因酵母菌．请结合如图回答问题：注：HindIII和ApaLI是两种限制酶，箭头表示酶的切割位置．（1）将图

Question

虫草中的超氧化物歧化酶（PSSOD）具有抗衰老作用．研究人员培育了能合成PSSOD的转基因酵母菌．请结合如图回答问题：

注：Hind  III和ApaL I是两种限制酶，箭头表示酶的切割位置．
（1）将图中的重组DNA分子用Hind  III和ApaL I完全酶切后，可得到___种DNA片段．图示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因，不能导人用于食品生产的酵母菌中，据图分析，可用___切除该抗性基因的部分片段使其失效，再用DNA连接酶使表达载体重新连接起来．
（2）作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因，必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，因此，图示表达载体上的URA3基因可作为___，供鉴定和选择；为了筛选出成功导人表达载体的酵母菌，所使用的培养基___（填“需要”或“不需要”）添加尿嘧啶．
（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为___．为了确定受体细胞中PSSOD基因是否转录，可用标记的___作探针进行分子杂交检测，分子杂交的原理是___．
（4）利用蛋白质工程获得活性更高的PSSOD时，需根据所设计蛋白质的结构推测其___
___序列，最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经___获得所需的基因．

Answer 1

（1）分析题图可知，将图中的重组DNA分子中存在HindIII的一个酶切位点，存在ApaLI的两个酶切位点，因此用两种酶同时切割环状质粒，会得到3种不同的DNA片段．图示的表达载体存在氨苄青霉素抗性基因，不能导人用于食品生产的酵母菌中，否则会导致人体对抗生素不敏感，因此可以利用ApaLI切除该抗性基因的部分片段使其失效，再用DNA连接酶使表达载体重新连接起来．
（2）作为受体细胞的酵母菌缺失URA3基因，必须在含有尿嘧啶的培养基中才能存活，因此，图示表达载体上的URA3基因可作为标记基因，供鉴定和选择；由于导入的表达载体的酵母菌中含有URA3基因，而普通酵母菌中不含有URA3基因，因此为了筛选出成功导人表达载体的酵母菌，所使用的培养基不需要添加尿嘧啶．
（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化．为了确定受体细胞中PSSOD基因是否转录，可用标记的PSSOD基因作探针进行分子杂交检测，分子杂交的原理是碱基互补配对．
（4）利用蛋白质工程获得活性更高的PSSOD时，需根据所设计蛋白质的结构推测其氨基酸序列，最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经基因修饰获得所需的基因．
故答案为：
（1）3               ApaL I
（2）标记基因      不需要
（3）转化      PSSOD基因      碱基互补配对
（4）氨基酸     基因修饰