用CTAB法提取老玉米叶DNA，OD260/OD280值正常，但OD260/OD230值总是小于2.0，最好的也不过1.8。怎么解决？试过沉淀后用乙醇多洗几遍，但是没什么效果。在用这些DNA做指纹图谱的时候总是有一些

Question

用CTAB法提取老玉米叶DNA，OD260/OD280值正常，但OD260/OD230值总是小于2.0，最好的也不过1.8。怎么解决？试过沉淀后用乙醇多洗几遍，但是没什么效果。在用这些DNA做指纹图谱的时候总是有一些标记出不来。（能出来的标记始终能出来，开始没出来的反复做最终也只出来几个，还是有4个左右出不来）现在已经排除了是反应体系或是PCR过程或是电泳过程的问题。

Answer 1

先说下吸光度和比值的意义。 A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液； A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。 A260/A280和A260/A230 是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。 A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。 我的建议：将所提取的DNA跑琼脂糖凝胶电泳，然后回收纯化一下。 另提供一种CTAB改进法配方： 组份Tris-HCl （pH8.0） EDTA （pH8.0） NaCl CTAB PVP40 β-巯基乙醇 终浓度 100 mM 20 mM 1.4M 3%(W/V) 5%(W/V) 2%（V/V）使用前加入 PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。 希望对你有所帮助！