人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白．如图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位

Question

人乳铁蛋白是一种重要的药用保健蛋白．如图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tet^r表示四环素抗性基因，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
识别序列 及切割位点

（1）①过程常采用的方法是___．
（2）构建基因表达载体时，需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和___ 之间，这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达．
（3）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是___．
（4）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含___ （填“四环素”或“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是___．
（5）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为___，对于该部位，这两种酶___（“都不能”或“只有一种能”）切开．

Answer 1

（1）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（2）构建基因表达载体时，需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和终止子之间，这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达．
（3）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3AI还可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Sau3AI．
（4）据用限制酶Sau3AI切割后会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此倒入重组质粒的受体细胞可能在含有氨苄青霉素的培养基上生存下来．
（5）根据表格中各种限制酶的识别序列和切割位点可知，若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶都不能切开．
故答案为：
（1）显微注射法
（2）终止子
（3）Sau3AⅠ
（4）氨苄青霉素     用限制酶切割后破坏了Tet^r基因，但不会破坏Amp^r基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来
（5）    都不能