临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验．实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性．回答下列问题：（1）为了

Question

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验．实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性．
回答下列问题：
（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用______法或______法将样本接种于______表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得．
（2）为统计样品中活菌的数目，取样品适当稀释，用______法接种于培养基表面，在37℃培养箱中培养适当时间后形成菌落，一般选择菌落数在______的平板进行计数
（3）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，在该病菌菌落均匀生长的平板的不同位置，分别放置含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，由此推断，该病人目前适合使用的抗生素是______．含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明______；若抗生素B的滤纸片周围没有出现透明圈，最可能的原因是______导致的结果；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的______，也可能是由于______产生的抗生素D的______，这种变异的特点是______．
（4）培养基的灭菌方法是______灭菌法，接种环的灭菌方法是______灭菌法．接种过程应该在______进行．

Answer 1

（1）分离菌落常用稀释涂布平板法或划线涂布法，接种于固体培养基的表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得．
（2）取该单菌落适当稀释，使其“均匀生长”的方法是用涂布法接种于固体培养基表面，适宜温度培养，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数．
（3）在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示着此种抗生素抗菌的强弱，由于四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B，可以推断出抗生素A对该致病菌的效果最好，含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性较A的弱，若抗生素B的滤纸片周围没有出现透明圈，最可能的原因是该病人长期服用抗生素B导致致病菌产生了抗药性，含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的杂菌污染，也可能是由于基因突变产生的抗生素D的耐药菌，基因突变的特点是不定向的．
（4）培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，接种环的灭菌方法是灼烧灭菌，接种过程应该在点燃的酒精灯旁进行，防止杂菌污染．
故答案为：
（1）划线   稀释涂布（或涂布）  固体培养基
（2）涂布     30-300   
（3）A    该致病菌对C的敏感性比对A的弱    该病人长期服用抗生素B  杂菌污染   基因突变  耐药菌   不定向的
（4）高压蒸汽   灼烧   点燃的酒精灯旁