某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示，实验步骤如图所示．请分

Question

某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示，实验步骤如图所示．请分析回答下列问题：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g
溶解后自来水定容到1 000mL

（1）培养基的制备步骤：计算→称量→溶化→___→倒平板．培养基中加入尿素的目的是___．
（2）实验需要振荡培养，原因是___．转为固体培养时，常采用___法接种，获得单菌落后继续筛选．
（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体．其中需要灭菌的是___（填序号）．
（4）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入酚红指示剂后变红，说明“目的菌”能分解尿素，理由是细菌合成的___酶将尿素分解为___和CO₂，pH升高，使酚红指示剂变红．
（5）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24～48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中___倍的稀释比较合适．

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数	>500	367	248	36	18

Answer 1

（1）培养基的制备步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板．该实验的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌．
（2）由于分解尿素的菌是需氧微生物，因此震荡培养的目的是为目的菌提供氧气．转为固体培养时，常采用稀释涂布平板法接种，获得单菌落后继续筛选．
（3）为了保证培养物不被污染，对培养细菌用的培养基与培养皿和玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管要进行灭菌，实验操作者的双手要进行消毒．
（4）尿素被分解尿素的菌氧化成氨气，氨气会使培养基碱性增强，pH升高，指示剂酚红变红，因此以通过在培养基中加入酚红指示剂，检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解．
（5）观察并统计菌落数应选30-300之间的培养皿进行统计，故应选10⁶或10⁵倍的稀释比较合适．
故答案为：
（1）灭菌 　  筛选目的菌
（2）为目的菌提供氧气　  涂布平板
（3）①②
（4）脲    氨        
（5）10⁶和10⁵