生化考试题，求答案!!!!!!试述以质粒原核表达载体，克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌综合进行表达的基本流程，简要说明实验室中可能遇到的问题及可能解决的办法？

Question

生化考试题，求答案!!!!!!
试述以质粒原核表达载体，克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌综合进行表达的基本流程，简要说明实验室中可能遇到的问题及可能解决的办法？

Answer 1

要完成这个实验，首先需要克隆基因，然后连接到载体上，再转化进大肠杆菌中，摸索合适的条件使其基因产物表达，最好使其分泌到菌体后，这样才能方便检测。
首先在克隆基因时要设计合适的引物进行PCR，然后再将PCR产物纯化，PCR时也需要摸索条件。
然后是连接，要使用合适的载体，一般PCR产物可以直接使用T载体进行连接。
转化的时候要确定所制备的感受态细胞是可用的，最好用蓝白斑筛选。
最后可以用WESTERN去检验表达的产物，如果产物是蛋白质的话。