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已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,且限制酶的切点是唯一的,外源DNA插入会导致#应的基因失活.请回答有关基因工程操作的问题:(1)图1表示的是1个经过的作为载体的质粒
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已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,且限制酶的切点是唯一 的,外源DNA插入会导致#应的基因失活.请回答有关基因工程操作的问题:
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(1)图1表示的是1个经过___的作为载体的质粒.作为基因表达载体除图1所示结构外,还需具有___.
(2)根据图中所给信息,构建基因表达载体时,应选用的限制酶是___.若将基因表达载体导入大肠杆菌,一般先用钙离子处理,使其成为感受态细胞,以利于___,然后调控温度完成转化过程.
(3)为了筛选出含目的基因的大肠杆菌,应在培养基中添加___;培养一段时间后,平板上长出菌落.用PCR技术鉴定时,所用的引物是图2中___.PCR技术扩增目的基因,每一循环包括变性、___、___三步.
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(1)图1表示的是1个经过___的作为载体的质粒.作为基因表达载体除图1所示结构外,还需具有___.
(2)根据图中所给信息,构建基因表达载体时,应选用的限制酶是___.若将基因表达载体导入大肠杆菌,一般先用钙离子处理,使其成为感受态细胞,以利于___,然后调控温度完成转化过程.
(3)为了筛选出含目的基因的大肠杆菌,应在培养基中添加___;培养一段时间后,平板上长出菌落.用PCR技术鉴定时,所用的引物是图2中___.PCR技术扩增目的基因,每一循环包括变性、___、___三步.
▼优质解答
答案和解析
(1)图1为质粒,天然的质粒不能直接作为载体,基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的.基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等,图中已经有启动子和标记基因(四环素抗性基因),还缺少目的基因和终止子.
(2)选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点,但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失,因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割.将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+处理,使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态,然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合,调控温度完成转化过程.
(3)由图可知,标记基因是四环素抗性基因,因此要筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在培养基中添加四环素.PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链,故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙.PCR技术扩增目的基因,每一循环包括变性、复性、延伸三步.
故答案为:
(1)人工改造 目的基因和终止子
(2)BclI和HindⅢ吸收周围环境中的DNA分子
(3)四环素 引物甲和引物丙 复性(退火) 延伸
(2)选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点,但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失,因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割.将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+处理,使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态,然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合,调控温度完成转化过程.
(3)由图可知,标记基因是四环素抗性基因,因此要筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在培养基中添加四环素.PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链,故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙.PCR技术扩增目的基因,每一循环包括变性、复性、延伸三步.
故答案为:
(1)人工改造 目的基因和终止子
(2)BclI和HindⅢ吸收周围环境中的DNA分子
(3)四环素 引物甲和引物丙 复性(退火) 延伸
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