已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致#应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题：（1）图1表示的是1个经过的作为载体的质粒

Question

已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一 的，外源DNA插入会导致#应的基因失活．请回答有关基因工程操作的问题：

（1）图1表示的是1个经过___的作为载体的质粒．作为基因表达载体除图1所示结构外，还需具有___．
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是___．若将基因表达载体导入大肠杆菌，一般先用钙离子处理，使其成为感受态细胞，以利于___，然后调控温度完成转化过程．
（3）为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加___；培养一段时间后，平板上长出菌落．用PCR技术鉴定时，所用的引物是图2中___．PCR技术扩增目的基因，每一循环包括变性、___、___三步．

Answer 1

（1）图1为质粒，天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的．基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等，图中已经有启动子和标记基因（四环素抗性基因），还缺少目的基因和终止子．
（2）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca²⁺处理，使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合，调控温度完成转化过程．
（3）由图可知，标记基因是四环素抗性基因，因此要筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在培养基中添加四环素．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．PCR技术扩增目的基因，每一循环包括变性、复性、延伸三步．
故答案为：
（1）人工改造           目的基因和终止子
（2）BclI和HindⅢ吸收周围环境中的DNA分子
（3）四环素       引物甲和引物丙     复性（退火）     延伸