如图为利用人成纤维细胞（具分裂能力、能在HAT培养基上存活）和小鼠骨髓瘤细胞（具分裂能力、不能在HAT培养基上存活）进行人类基因定位的操作示意图，请回答相关问题．（1）图示方法

Question

如图为利用人成纤维细胞（具分裂能力、能在HAT培养基上存活）和小鼠骨髓瘤细胞（具分裂能力、不能在HAT培养基上存活）进行人类基因定位的操作示意图，请回答相关问题．

（1）图示方法是___技术的应用，该技术的基础是___技术．
（2）操作所用的成纤维细胞应传代___代以内，诱导融合时需要加入的促融剂是___．
（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成，再经过一次___，形成单核细胞．
（4）HAT培养基起___培养作用，培养时温度应为___℃，操作中加入乌本苷的目的是___．
（5）下表所示为杂交细胞A、B、C、D中存在的人类染色体及人类特有的4种酶（+表示存在，-表示不存在），这4种酶均为单基因编码产生，据表推断，编码酶Ⅰ的基因位于___染色体上，编码酶___的基因位于染色体2上．

杂交细胞	酶				人类染色体
	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	1	2	3
A	-	+	+	+	-	+	-
B	+	-	+	-	+	-	-
C	-	-	-	-	-	-	+
D	+	+	-	+	+	+	+

Answer 1

（1）由图分析，该过程为动物细胞融合，其基础是动物细胞培养．
（2）目前使用的正常细胞通常为10代以内的，因为10代以内的细胞可以保持细胞正常的二倍体核型．诱导两个动物细胞融合的方法：物理（离心、振动、电刺激）、化学（PEG）、生物诱导（灭活的病毒）．
（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞，经过一次有丝分裂，形成单核细胞．
（4）据题干信息，人成纤维细胞能在HAT培养基上存活，而小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活，则HAT培养基起选择培养作用，筛选出人成纤维细胞和成纤维细胞融合的杂交细胞；动物细胞培养的适宜温度为36.5±0.5℃；由图可知，操作中加人鸟本苷的目的是除去成纤维细胞，筛选出杂交细胞．
（5）杂交细胞B只存在1号染色体，其表达出酶Ⅰ、Ⅲ，说明编码酶Ⅰ的基因位于1号染色体上；杂交细胞A中只存在2号染色体，但表达出酶Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，而杂交细胞B只存在1号染色体，也能表达出酶Ⅲ，说明编码酶Ⅱ和Ⅳ的基因位于2号染色体上．
故答案为：
（1）动物细胞融合动物细胞培养
（2）10 PEG（或灭活病毒）
（3）多（双）核细胞有丝分裂
（4）选择 36.5±0.5 除去成纤维细胞
（5）1Ⅱ和Ⅳ