Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：（1）分离、培养上皮细胞时，在合成培养基中应添加血

Question

 Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：
（1）分离、培养上皮细胞时，在合成培养基中应添加血清、血浆，此外应定期更换培养液，其目的是 ___．
（2）步骤①中，在核移植前应去除 ___，此技术属于 ___工程范畴．
（3）步骤③中，根据Rag₂基因的核苷酸序列设计 ___并扩增Rag₂基因片段．用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有 ___酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的 ___，用抗Rag₂ 蛋白的抗体进行杂交实验．
（5）科研人员若要进行小鼠体外受精方面的研究，在进行受精前，收集的精子需要通过 ___法或 ___法进行获能处理．
（6）若让小鼠自然繁殖，在体内受精过程中，获能的精子与卵子在输卵管相遇时，首先发生 ___．精子入卵后，防止多精入卵受精的第二道屏障是 ___．

Answer 1

（1）合成培养基中添加血清、血浆的目的是补充营养物质，定期更换培养液的目的是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害．
（2）核移植是指将体细胞核移植到去核卵母细胞中，因此①核移植过程中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核；核移植技术属于细胞工程范畴．
（3）步骤③中，根据Rag₂基因的核苷酸序列设计引物并扩增Rag₂基因片段．基因工程中构建基因表达载体时，应用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，若用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段，则为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可采用抗原-抗体杂交法，即提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质（抗原），用抗Rag₂ 蛋白的抗体进行杂交实验．
（5）精子获能的方法包学培养法、化学诱导法．
（6）在体内受精过程中，获能的精子与卵子在输卵管相遇时，首先发生顶体反应，释放顶体酶，便于精子穿过卵丘细胞和透明带．精子入卵后，防止多精入卵受精的第一道、第二道屏障依次是透明带反应、卵黄膜封闭作用．
故答案为：
（1）补充营养物质，同时清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害   
（2）卵母细胞的细胞核细胞   
（3）引物   HindⅢ和PstⅠ
（4）蛋白质
（5）培养   化学诱导
（6）顶体反应    卵细胞膜反应