（2014•福建）Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细

Question

（2014•福建）Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的______．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到______期时，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体．可以根据Rag₂基因的______设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有______酶的酶切位点．
（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．

Answer 1

（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）内细胞团位于囊胚中，所以重组胚胎培养到囊胚期．
（3）设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag₂基因的核苷酸序列进行设计．Rag₂基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的，所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点．
（4）基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交．
故答案为：
（1）细胞核；
（2）囊胚；
（3）核苷酸序列；   HindⅢ和PstⅠ；
（4）蛋白质；