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(2014•福建)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细
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(2014•福建)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:
![](http://hiphotos.baidu.com/zhidao/pic/item/d62a6059252dd42a5a30e91f003b5bb5c9eab84d.jpg)
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______.
(2)步骤②中,重组胚胎培养到______期时,可从其内细胞团分离出ES细胞.
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的______设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______酶的酶切位点.
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
![](http://hiphotos.baidu.com/zhidao/pic/item/d62a6059252dd42a5a30e91f003b5bb5c9eab84d.jpg)
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的______.
(2)步骤②中,重组胚胎培养到______期时,可从其内细胞团分离出ES细胞.
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体.可以根据Rag2基因的______设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有______酶的酶切位点.
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验.
▼优质解答
答案和解析
(1)核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中,所以实验前要去除卵母细胞的细胞核.
(2)内细胞团位于囊胚中,所以重组胚胎培养到囊胚期.
(3)设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计.Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的,所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点.
(4)基因表达的产物是蛋白质,所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)细胞核;
(2)囊胚;
(3)核苷酸序列; HindⅢ和PstⅠ;
(4)蛋白质;
(2)内细胞团位于囊胚中,所以重组胚胎培养到囊胚期.
(3)设计引物要遵循碱基互补配对原则,所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计.Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割获得的,所以表达载体应具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位点.
(4)基因表达的产物是蛋白质,所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交.
故答案为:
(1)细胞核;
(2)囊胚;
(3)核苷酸序列; HindⅢ和PstⅠ;
(4)蛋白质;
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