正在做细胞的三维培养,用的是BD公司的I型胶原和matrixgel胶,但怎么不凝啊?买的I型胶原是已经溶解在醋酸溶液中的,无菌包装,3.45MG/ML,按照说明书的提示加了0.023倍体积的氢氧化钠中和,然后补

Question

正在做细胞的三维培养,用的是BD公司的I型胶原和matrix gel胶,但怎么不凝啊?
买的I型胶原是已经溶解在醋酸溶液中的,无菌包装,3.45MG/ML,按照说明书的提示加了0.023倍体积的氢氧化钠中和,然后补加培养基至胶原终浓 度为2.5MG/ML,和细胞沉淀混匀后,置于做好的模型内,室温下10分钟,37度培养箱内 三个小时后,再加6ML培养基,但二十四小时了,胶仍不凝,有的已经散开了,请问我哪个地方做错了?是氢氧化钠的体积不对么?胶凝了以后应该是白色不透 二十四小时是不是就应该凝了?如果错了,是错在哪里了?

Answer 1

博凌科为没有用过BD公司的胶原,但使用过Sigma的I型胶原(固体),一般是自己配制成液态,然后根据需要按一定比例添加10x浓缩培养基及血清(保证 细胞的营养),用1M浓度的NaOH调节pH值约7.2,再和细胞混合均匀后添加到培养器皿中,直接放到37度培养箱,一般也就是30分钟左右即可凝固,等完全凝固后,再在其上添加培养基.胶凝固后,由于其内添加了培养基,所以一般是粉色的.另外,你在添加NaOH及培养基后,测没测过胶原的pH值?再者会不会在胶原中添加培养基量太多?培养基占的比例大,也会影响到胶原凝固.