大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖

Question

大肠杆菌 pUC18 质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于 LacZ 基因中，如果没有插入外源基因， LacZ 基因便可表达出 β 半乳糖苷酶。当培养基中含有 IPTG 和 Xgal 时， Xgal 便会被 β 半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答问题。

(1) 对已获得的目的基因可利用 ________ 技术进行扩增。

(2) 目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要 DNA 连接酶恢复 ________ 键。

(3) 将试管 Ⅰ 中的物质和大肠杆菌共同置于试管 Ⅱ 的目的是 ________ ；大肠杆菌需事先用 Ca ^{2 ＋} 进行处理，目的是 ________________ 。

(4) 将试管 Ⅱ 中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质 ________ 和生长因子，还应加入 IPTG 、 Xgal 以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出 ________ 。

(5) 若观察到培养基上出现 ________ 色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有 LacZ 基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是 __________________________ 。

Answer 1

答案　 (1)PCR

(2) 磷酸二酯

(3) 进行转化　使大肠杆菌细胞处于感受态

(4) 碳源、氮源、无机盐、水　导入 pUC18 质粒的大肠杆菌

(5) 白　无论大肠杆菌中是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落