（2014•徐州三模）利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗，将会克服常规疫苗使用时所面临的诸多问题．下图是培育转基因马铃薯生产某种疫苗的过程，其中四种限制酶1、2、3、

Question

（2014•徐州三模）利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗，将会克服常规疫苗使用时所面临的诸多问题．下图是培育转基因马铃薯生产某种疫苗的过程，其中四种限制酶1、2、3、4的识别序列和切点分别是一C↓CTAGG一，-AC↓GT一，一G↓CTAGC一，一GAGCT↓C一．请据图回答：

（1）研究人员用限制酶l和酶3切割图中质粒，切割后所得的DNA片段在______的作用下自身连接成一大一小两个环（次生质粒），现同时用图中四种限制酶切割这两个次生质粒，可以得到______种DNA片段．
（2）在构建重组质粒A时，为了避免含抗原基因的DNA和质粒自身环化，应选用限制酶______对含抗原基因的DNA和质粒进行切割．
（3）理论上，基因组DNA中______个核苷酸对会出现一个限制酶2的酶切位点．
（4）在筛选含有目的基因的受体细胞的培养基中，除各种营养物质外还需要添加的物质______；含有目的基因的受体细胞能够培养成转基因植株的原理是______，在此过程中始终受______的调节．
（5）有科学家认为，转基因马铃薯并不适于生产可食用疫苗，反而有些水果或西红柿、黄瓜等更适宜，理由是______．

Answer 1

（1）连接DNA片段的酶是DNA连接酶．由分析可知，用四种酶同时切割这两上次生质粒，可得到2个DNA分子片段．
（2）由图可知，在目的基因的一侧有酶1、4，另一侧有酶3，而酶1和酶3能形成自身连接，故选酶3和酶4．
（3）酶2的切割序列为-ACTG-，出现A概率为(1)/(4)，同理出现C、T、G的概率都为(1)/(4)，所以同时出现-ACTG-的概率为(1)/(44)．所以基因组DNA中4⁴个核苷酸对会出现一个限制酶2的酶切位点．
（4）由于标记基因是卡那霉素基因，所以培养基还需要加入卡那霉素．受体细胞能够培养成转基因植株的原理是植物细胞的全能性．植物组织培养过程始终受植物激素（生长素、细胞分裂素）调节．
（5）由于马铃薯在烹饪过程中会使所含的抗原失去活性，故转基因马铃薯并不适于生产可食用疫苗，而水果和西红柿等可直接食用可用于生产可食用疫苗．
故答案为：
（1）DNA连接酶  2        
（2）酶3和酶4
（3）4⁴（4）卡那霉素    植物细胞的全能性    植物激素（种类和比例）
（5）马铃薯在烹饪过程中会使所含的抗原失去活性，而水果和西红柿等可直接食用