反刍动物瘤胃内栖息着大量的乳酸产生菌如乳酸杆菌，可发酵产生大量的乳酸进而导致瘤胃酸中毒的发生；同时瘤胃中还存在大量的乳酸利用菌，可发酵乳酸．（1）乳酸是相应的微生物进行

Question

反刍动物瘤胃内栖息着大量的乳酸产生菌如乳酸杆菌，可发酵产生大量的乳酸进而导致瘤胃酸中毒的发生；同时瘤胃中还存在大量的乳酸利用菌，可发酵乳酸．
（1）乳酸是相应的微生物进行___产生的，要分离和计数瘤胃液中的乳酸利用菌，必须先制备培养基，该培养基以___为唯一碳源，采用___法灭菌，采用___法接种，并在适宜条件下培养．
（2）在观察结果时发现培养的菌落形态多样，其原因可能是___．
（3）体外模拟急性酸中毒条件下添加乳酸利用菌对瘤胃微生物体外发酵的影响．实验设计：实验采用体外批次培养，每个发酵瓶接种12mL 经过四层纱布过滤的新鲜瘤胃液，根据菌株接种量（0mL、4mL、8mL）分为3组，即T₀、T₄和T₈组，各组均设4个重复．如表所示，据此回答下列问题：

	T0组	T4组	T8组
新鲜瘤胃液	+12mL	+12mL	+12mL
菌株接种量	0mL	4mL	8mL
无菌发酵液	X mL	Y mL	0mL
培养温度	39℃	39℃	39℃

①该实验的自变量是___．
②菌株接种量不足8mL的发酵瓶，用该菌株的___补足8mL，以保证每个发酵瓶内培养液体积一致．表中的X、Y分别是___mL．
③39℃条件下培养18h，每间隔3h测定pH值（不测定初始值），同时收集样品以备测定各时间点的乳酸浓度．测定的乳酸浓度数据有___个．

Answer 1

（1）题干所述乳酸是乳酸菌无氧呼吸产生的，要分离和计数瘤胃液中的乳酸利用菌，需要使用以乳酸为唯一碳源的选择培养基．培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌．用稀释涂布平板法接种培养．
（2）观察结果时发现培养的菌落形态多样，可能的原因是乳酸利用菌的种类较多，或者操作过程污染了杂菌．
（3）①据表分析，该实验的自变量是菌种的接种量．
②为保证无关变量的相同或一致，菌株接种量不足8mL的发酵瓶，需要用该菌株的无菌发酵液补足8mL，以保证每个发酵瓶内培养液体积一致．据表分析，表中的X为8ml，Y 为4ml．
③根据题意，每组均需测定6次pH，共3组，4个重复，所以测定的乳酸浓度数据有6×3×4=72个．
故答案为：
（1）无氧呼吸（或发酵或呼吸作用或代谢）    乳酸    高压蒸汽灭菌      稀释涂布平板法
（2）乳酸利用菌的种类较多，或者操作过程污染了杂菌
（3）①菌株的接种量        
②无菌发酵液        8、4 
③72